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天津医科大学第二医院 天津医科大学麻醉学教研室,300211 马文庭 郑宝森李东亮 邓乃封 薛玉良摘 要 胶原蛋白酶（collagenase）简称胶原酶，是可用于脊椎介入治疗椎间盘（intervertebral disc,IVD）源性疼痛的关键药物。但目前学术界对该技术争议较大。 目的：本研究旨在体外培养的基础上，观察胶原酶对IVD组织的形态学影响，探讨胶原酶对IVD组织的溶解机制。 材料与方法：实验一 构建IVD组织与细胞体外培养系统 分别对人变性IVD组织及家兔正常IVD细胞培养并观察其形态学变化。实验二 观察胶原酶对体外培养IVD组织及细胞的形态学影响。第一部分：随机取颈IVD突出症患者手术切除的变性IVD组织行体外培养。随机分为实验组①200U/ml、②400U/ml胶原酶和对照组（等量生理盐水），每组6例镜下观察各组24h、48h、1w时组织学。 第二部分：随机取实验家兔IVD组织行体外培养，待形成单层细胞可传代后随机分为实验组①、②、③和对照组，每组6例。分别加入200U/ml、400U/ml、800U/ml胶原酶200µl、等量生理盐水。镜下观察各组24h、48h、1w时组织学。 第三部分：1. 随机取手术患者新鲜IVD组织行体外培养，随机分为实验组和对照组，每组8例。分别加400U/ml胶原酶200µl、等量生理盐水。分别于 0h、12h、24h、36h称湿重。2.随机取家兔IVD组织行体外培养, 按上述方法分组，于各时段行活细胞计数。采用SPSS13.0统计软件分析。 结果 实验一：①变性IVD组织在体外培养过程中，IVD细胞状态良好，细胞外基质丰富，胶原纤维生长旺盛。②家兔IVD细胞呈单层贴壁生长，并呈现多种形态。原代培养1周时细胞形态明显改变，由原初多角形、不规则形变为长梭形且IVD细胞排列与其长轴平行。实验二 第一部分：IVD组织中胶原纤维在胶原酶组随时间延长逐渐减少，而在对照组生长旺盛。第二部分 200U/ml、400U/ml胶原酶组以及对照组中的IVD细胞随时间延长生长活跃，而800 U/ml胶原酶可致单层IVD细胞在24小时内坏死。第三部分 统计学分析 颈IVD突出症患者的变性IVD组织在湿重称量方面，以及家兔正常IVD组织在活细胞计数方面显示，胶原酶组与对照组比较均有统计学差异（P≤0.001）。 结论： 1．200U/ml、400U/ml浓度的胶原酶对人变性IVD组织中胶原纤维至少在24小时内即可造成溶解，在1周内变性IVD 组织即可表现出明显形态学变化。 2．200U/ml、400U/ml浓度的胶原酶对家兔单层培养的IVD细胞形态学一周内无明显影响。800U/ml浓度的胶原酶在24小时内即可使其坏死。 3．胶原酶可有效溶解IVD组织,包括变性和正常的IVD组织。 关键词：胶原蛋白酶；椎间盘；体外培养；化学溶解；介入治疗；间盘源性疼痛 |
椎间盘组织与细胞体外培养及胶原蛋白酶对其形态学影响的实验研究
作者：马文庭 郑… 文章来源：天津医科大学第二医院 天津医科大学麻醉学教研室,30021 点击数： 更新时间：2007-3-18
文章录入：流云似海 责任编辑：流云似海
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